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  • BORHEE™Taq HRM PCR Mix

    更新:2015-11-17 22:09:50      点击:
    • 产品品牌   BORHEE
    • 产品型号   QPCR-HRM-1
    • 产品描述

      冻干HRM PCR试剂...

    产品介绍

    保存温度:室温 (Room Temperature)

    规格: 96 Tests/ 12 条八排管

     

    ● 产品说明:

    本产品是冻干型的预混产品,其中使用了抗Taq抗体和LA PCR 法相结合的Hot Start Taq酶,可以进行高效的PCR扩增以及对温度的耐受性。八排管中每个管内已分装冻干的Hot Start Taq酶、Evagreen 染料,MgCl2、dNTP和PCR Buffer,只需加入灭菌蒸馏水、引物和模板即可进行PCR反应,可有效避免实验操作过程中引入的污染和减少反应组份添加的误差,同时也能在Evagreen 染料的存在下进行QPCR以及HRM溶解曲线的结果分析。本产品在室温保存性能稳定,运输和保存时不需要冷藏或冷冻条件。      


    ● 纯 度:

    1. 将 1管的本产品溶解后,和 0.6 μg 的λ-Hind III 在 74℃下  反应 1 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化。   

    2. 将 1管的本产品溶解后,和 0.6 μg 的 supercoiled pBR322   DNA 在 74℃下反应 1 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化。   

    3. 将 1管的本产品溶解后,和 0.6 μg 的λ DNA 在 74℃下反  应 1 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化。      


    ● 用 途:Hot Start PCR法扩增DNA片段,可实时观察QPCR曲线以及HRM溶解曲线。     


    ● PCR扩增产物 :

    使用本制品扩增得到的PCR产物3’端几乎都附有一个“A”碱基,  可直接克隆于T-Vector中;经末端平滑化和磷酸化处理后可克隆于平滑末端载体中。      


    ● PCR反应性能:

    1. 以人基因组DNA为模板,可以很好地扩增12 kb的DNA片段。   

    2. 对94℃加热30秒的反应液和未加热反应液进行了PCR反应的比较,确认到抗体对Taq DNA polymerase活性的抑制作用。    

     

    ● HRM

    荧光染料可分为非饱和染料和饱和染料。饱和染料不会抑制PCR反应,所以能以高浓度存在于定量反应体系中,使双链PCR产物与染料结合程度达到饱和状态,从而在高温解链时不会产生染料重排现象。因此,饱和染料能够很好的区分扩增产物之间的单碱基差异。在饱和染料中进行PCR,再对产物进行熔解曲线分析,根据熔解曲线的变化情况判断产物中碱基差异的情况,这种研究方法称为高分辨率熔解(High resolution meltingHRM)分析。


    ● 操作流程:

    【一般PCR反应体系为50 μl】   

    将八排管上的密封膜揭开后,按下列组份配制反应液。反应液配制可在室温下进行。     

    BORHEE™Taq HRM PCR Mix  1 tube

    Template < 100 ng

    Primer 1 0.2~0.4 μM (final conc.) 

    Primer 2 0.2~0.4 μM (final conc.) 

    灭菌蒸馏水 up to 25 μl 

    加入引物,模板和蒸馏水后,放置1min,使冻干的Master Mix完全溶解,振荡器上震荡混匀。反应液配制后,使用制品中附带的八排管盖盖紧盖子。


    ● PCR反应条件   需要在PCR前,95度3min激活Hot Start酶。


     注意事项:

    HRM对仪器和软件的要求较高,请于实验前确认仪器及当前软件版本是否适用于HRM分析。目前市面上常见的荧光定量PCR仪器中:ABI 7500Fast/7900HT/7900Fast/StepOne/StepOnePlusBio-rad CFX96/CFX384Roche LightCycler 480Qiagen Rotor-Gene 6000/Rotor-Gene Q等仪器配合专用软件可进行HRM实验。

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